1 適用范圍

 

本標準規(guī)定了奶及奶制品中雌三醇殘留量的測定方法（本實驗樣品為牛奶）。  

參考標準：《GB 29698-2013 食品安q國家標準 奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇多殘留的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》

2 提取步驟

準確稱取10g試樣（j確至0.01g）于50 mL離心管中，加入5mL乙腈、15mL乙酸乙酯，渦旋3min，以8000r/min離心5min，吸取上清液于50mL雞心瓶中，殘渣重復(fù)上述步驟重復(fù)提取一次，合并提取液。于40℃下濃縮至近干，用1mol/L NaOH溶液6mL分三次溶解，轉(zhuǎn)至另一50mL離心管中，加20mL正己烷渦旋振蕩1min，以8000r/min離心3min，收集下層提取液，用5mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至5.0-5.2，備用。

3 凈化步驟

SPE柱：月旭Welchrom  C18小柱，規(guī)格：500mg/6mL。

活化平衡：5mL甲醇，5mL水；

上樣：將備用液全部上樣，棄去；

淋洗：5mL水，棄去并壓干；

洗脫：5mL甲醇，收集并壓干。

收集洗脫液于40℃氮吹至干，用5mL 95%正己烷-乙酸乙酯溶液溶解殘余物，待凈化。

SPE柱：月旭Welchrom  Silica小柱，規(guī)格：500mg/6mL。

活化平衡：5mL正己烷；

上樣：將待凈化液全部上樣，棄去；

淋洗：5mL正己烷，棄去并壓干；

洗脫：5mL 70%正己烷-乙酸乙酯溶液，收集于具塞玻璃試管中并壓干。

4 衍生化

將上述洗脫液于40℃氮吹至干，加入30μL七氟丁酸酐、70μL丙酮蓋緊蓋子，渦旋混合30s，于30℃恒溫箱中衍生30min，氮吹至干，準確加入1mL正己烷，渦旋混合10s，溶解殘余物，供GC-MS分析。

5 色譜條件

氣相色譜條件

色譜柱：WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm；

進樣口溫度：250℃；

升溫程序：120℃，保持2min，以15℃/min升溫至250℃，再以5℃/min升溫至300℃，保持5min；

載氣：高純氦氣（純度>99.999%）；

進樣方式：不分流進樣；

恒流模式：1.0mL/min；

進樣量：1μL。

質(zhì)譜條件

電離方式：電子轟擊電離源（EI）；

電離能量：70eV；

傳輸線溫度：280℃；

離子源溫度：230℃；

四極桿溫度：150℃；

監(jiān)測方式：449.1/409.1/356.1；

溶劑延遲：5min。