SN/T 2229-2008 茶葉中稻瘟靈測(cè)定操作要點(diǎn)及優(yōu)化

稱(chēng)取試樣5g，加入5g無(wú)水硫酸鈉和20mL乙腈，渦旋混勻2min。超聲提取10min，8000 rpm離心5min，將上清液通過(guò)通過(guò)裝有無(wú)水硫酸鈉的濾紙過(guò)濾脫水于100mL濃縮瓶中。再用20mL乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液于100mL濃縮瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上45℃濃縮至干，加入6mL正己烷溶解殘?jiān)齼艋?/p>

試樣稱(chēng)取2g，加入4mL飽和氯化鈉溶液，渦旋混勻0.5min。放置0.5h，加入20mL乙腈，用均質(zhì)器以10000r/min均質(zhì)2min，4000rpm離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至100mL濃縮瓶中。再用20mL乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液于100mL濃縮瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上55℃濃縮約5mL，濃縮提取液轉(zhuǎn)移至250mL分液漏斗中，加入100mL硫酸鈉溶液和40mL正己烷，振搖2min，靜置分層，將上清液通過(guò)將上清液通過(guò)裝有無(wú)水硫酸鈉的濾紙過(guò)濾脫水于200mL濃縮瓶中。再用40mL正己烷重復(fù)提取一次，合并提取液于200mL濃縮瓶中，45℃旋轉(zhuǎn)濃縮至干，加入5mL正己烷溶解殘?jiān)齼艋?/p>

在實(shí)際茶葉樣品的操作中，標(biāo)準(zhǔn)中采用了乙腈提取，再將提取液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入硫酸鈉溶液和正己烷進(jìn)行液液萃取，溶劑置換為正己烷后進(jìn)行旋蒸濃縮，然后再進(jìn)行過(guò)柱凈化，但我們按標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟實(shí)際進(jìn)行操作發(fā)現(xiàn)，回收率只有60%，我們進(jìn)行了減少稱(chēng)樣量、增加正己烷體積等操作，發(fā)現(xiàn)均不能得到很好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此我們采用去掉正己烷萃取這一操作，只用乙腈進(jìn)行提取，同時(shí)將無(wú)水硫酸鈉代替飽和氯化鈉溶液，以達(dá)到更好的除水效果，按此方案得到的回收率為103%。

標(biāo)準(zhǔn)中采用石墨炭黑柱與弗羅里硅土柱串聯(lián)凈化后，再用HLB固相萃取柱進(jìn)行凈化，具體操作如下：

SPE柱：石墨炭黑柱，1000mg/6mL；弗羅里硅土柱，1000mg/6mL。

活化：3mL丙酮、5mL正己烷；

上樣：待凈化液全部上樣，棄去流出液；

洗脫：石墨炭黑柱與弗羅里硅土柱串聯(lián)后，加入10mL正己烷-丙酮（8:2）洗脫，收集流出液，洗脫液經(jīng)60℃氮吹儀吹干，用6mL 30%甲醇溶液溶解殘?jiān)D(zhuǎn)移到HLB固相萃取柱中；

活化：3mL甲醇、3mL水；

上樣：待凈化液全部上樣，棄去流出液；

洗脫：加入14mL 80%甲醇溶液洗脫，收集流出液。

洗脫液經(jīng)60℃氮吹至約3mL后，加入5mL正己烷和5mL硫酸鈉水溶液，渦旋混勻，3000r/min離心3min，取上清液上機(jī)測(cè)定。

但在實(shí)際進(jìn)行操作中，我們采用Carb、Florisil PR、BRP固相萃取柱進(jìn)行凈化操作時(shí)，發(fā)現(xiàn)回收率只有70%左右，而去掉BRP固相萃取柱后，回收率為105%，且上機(jī)測(cè)定發(fā)現(xiàn)用Carb、Florisil PR柱已經(jīng)可以達(dá)到凈化效果，因此在我們的實(shí)驗(yàn)方案中去掉了BRP固相萃取柱。

SPE柱：Welchrom^® Carb，規(guī)格：1000mg/6mL；Welchrom^® Florisil PR，規(guī)格：1000mg/6mL。

活化：3mL丙酮，5mL正己烷，棄去；

上樣：待凈化液全部上樣，控制流速在1mL/min~2mL/min，棄去流出液；

洗脫：石墨炭黑柱柱與弗羅里硅土柱串接，加入10mL正己烷-丙酮（8:2）溶液洗脫，控制流速在1mL/min~2mL/min，收集流出液于15mL離心管中；

復(fù)溶：60℃氮吹至干，準(zhǔn)確加入1mL正己烷溶解殘?jiān)^(guò)0.22μm有機(jī)系濾膜后上GC檢測(cè)。

色譜柱：WM-1701，30m×0.32mm×0.25μm。

升溫程序：150℃（4min），30℃/min上升至260℃（5min），20℃/min升至270℃（10min）；

進(jìn)樣口：260℃，分流進(jìn)樣，分流比：20:1；

檢測(cè)器：350℃；

進(jìn)樣量：1μL；

載氣流量：1.0mL/min。