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021-50276769乳清蛋白是采用先進(jìn)工藝從牛奶中分離提取出來(lái)的珍貴蛋白質(zhì)，以其具有高生物價(jià)、高消化率、高蛋白質(zhì)功效比和高利用率等優(yōu)點(diǎn)，被譽(yù)為“蛋白zhi王"，是*的人體優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)補(bǔ)充劑之一。其含量的高低決定了嬰幼兒奶粉的品質(zhì)，相關(guān)國(guó)標(biāo)通過(guò)酸水解以后的氨基酸來(lái)評(píng)價(jià)乳清蛋白的含量，月旭科技推出的檢測(cè)方法檢測(cè)更加快捷可靠。
樣品前處理
稱(chēng)取0.1g試樣（含蛋白質(zhì)7.5mg-25mg的樣品），于水解管中，在冰水浴中冷卻 30min后加入2mL已經(jīng)冷卻的過(guò)甲酸溶液，蓋好瓶塞后置于0℃±1℃冰箱中，冰浴16h。向各水解管中加入0.3mL氫溴酸，振搖后冰浴 30min，在60℃±2℃氮吹儀上濃縮至干。向水解管內(nèi)加入6moL/L鹽酸10mL，沖入氮?dú)?min 后，擰緊螺絲蓋，將水解管放在110℃±1℃的恒溫干燥箱內(nèi)水解24h后取出冷卻至室溫。將水解液用超純水轉(zhuǎn)移并定容至25mL容量瓶中，混勻，濾紙過(guò)濾。吸取濾液1mL于60℃±2℃氮吹儀上濃縮至干，殘留物用1mL超純水溶解，待衍生。
標(biāo)準(zhǔn)品溶液
用超純水配置磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液1μmoL/mL，待衍生。
衍生方法
分別將月旭科技氨基酸衍生方法包中 A、B兩種衍生試劑用稀釋劑稀釋至原來(lái)濃度的 1/5；精密量取混標(biāo)溶液及樣品溶液各160μL，加入稀釋后的衍生溶液 A、B 各100μL，混勻，室溫反應(yīng)60min；然后加入正己烷溶液 400μL，旋緊蓋子后振搖10s，室溫靜置分層，取下層液200μL，加入800μL水中，混勻；再移取200μL加入到800μL水中，混勻，用0.45μm 有機(jī)濾膜過(guò)濾，即得。
色譜條件
色譜柱：月旭Ultimate® AQ-C18（4.6×250mm，3μm）。
柱溫：40℃；
紫外檢測(cè)器：254nm；
流速：1.0mL/min；
進(jìn)樣量：5μL。
譜圖和數(shù)據(jù)
1. 磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液1μmoL/mL。
2. 樣品水解
結(jié)論
用月旭Ultimate® AQ-C18（4.6×250mm，3μm）色譜柱，在該色譜條件下測(cè)定，能滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求。
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