劃重點！液相流動相使用的那些事兒

液相色譜是實驗室使用頻率非常高的儀器設備，在使用過程中會有許多小技巧和注意事項，今天小編就跟大家一起扒一扒流動相使用的那些事兒。

從上圖我們可以看出來，流動相在整個液相系統中起著重要的作用，類似我們身體的血液，起著運輸的作用，關于流動相那些事兒，我們一起來看看吧。

一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進行試驗，這樣可以很快地得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。

每減少10%的有機溶劑（甲醇或乙腈）的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規則。這是一個較為省力的辦法。調整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。

當分離達到一定合適的程度，應將有機溶劑10%的改變量調整為5%，并據此規則逐漸降低調整幅度，直至各組分的分離情況理想。

采用反相色譜法分離弱酸（3≤pK_a≤7）或弱堿（7≤pK_a≤8）樣品時，通過調節流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的K值越大，當pH值遠遠小于弱酸的pK_a值時，弱酸主要以分子形式存在；對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

鹵代溶劑可能含有微量的酸性雜質，能與HPLC系統中的不銹鋼反應。鹵代溶劑與水的混合物比較容易分解，不能存放太久。鹵代溶劑(如，CCL₄、CHCL₃等）與各種醚類（如，yi醚、二異丙醚、四氫呋喃等）混合后，可能會反應生成一些對不銹鋼有較大腐蝕性的產物，這種混合流動相應盡量不采用，或新鮮配制。此外，鹵代溶劑（如CH₂CL₂）與一些反應性有機溶劑（如乙腈）混合靜置時，還會產生結晶。總之，鹵代溶劑最好新鮮配制使用。如果是和干燥的飽和烷烴混合，則不會產生類似問題。

選擇微孔濾膜時，首先要考慮化學兼容性。濾膜是否耐酸、堿、有機溶劑等。幾種常見濾膜的特性及應用如下所示：

特性：親水性、高流速、高通量、低蛋白吸附、低溶出物、耐高壓滅菌。

應用：一般試劑，樣品的實驗室過濾；超純水、食品、飲料等的過濾；血清樣品的過濾。

特性：親水性、低吸附能力、低非特異性結合能力、熱穩定性。

應用：蛋白質和酶過濾；樣品前處理過濾中廣泛使用的濾膜之一。

特性：親水性、高流速、由硝酸纖維素和醋酸纖維素混合而成。

應用：微生物和顆粒分析；無菌測試。

特性：親水性、耐弱酸、高蛋白結合能力。

應用：微生物檢測與捕獲等；微量元素分析等；醫學研究及診斷方面的生物工程，生化分析等。

特性：疏水性、高靈敏度、機械強度高、蛋白吸附低、具有良好的耐熱性及化學穩定性。

應用：氣體及蒸汽過濾， 高溫液體過濾，溶劑和化學原料的凈化過濾；油類中不溶物的凈化；化學物質的分離和提純。

特性：疏水性、具有廣泛的化學兼容性、耐溫性好、抗強酸強堿、化學腐蝕性較強的溶劑及氧化劑。

應用：化工、醫藥、食品、能源等領域，幾乎能過濾所有的有機溶液；強酸和強堿的過濾；高溫液體的過濾；特殊化學試劑的過濾；氣體的澄清過濾。

特性：親水性、耐溫性能好、強度高、化學穩定性好、耐稀酸稀堿等。

應用：樣品的除菌，過濾；工業水的過濾。

特性：耐酸堿、耐磨損、耐沖擊、微孔分布均勻、過濾面積大、透水性好。

應用：在藥品、飲料、日常用水、廢水、空氣過濾等方面廣泛應用。

具體實驗中，應該根據您的過濾目的實驗需求來選擇合適的孔徑的濾膜和濾器。

0.1μm: 能去除樣品中的支原體。

0.2μm：可以去除99.99%的細菌微生物，達到GMP或者藥典的除菌要求，還可以去除樣品、流動相中極細微的顆粒。

0.45μm: 能濾除大多數細菌微生物，對常規樣品、流動相等的過濾，能滿足一般色譜要求。

0.8μm及以上：可以過濾較大顆粒的雜質或者難處理、渾濁樣品的預處理，經預處理后再選擇相應濾膜進行過濾。

對于水相溶液來說，首要的問題是防止污染。對于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相，常換常新，夏天對于純水或者純鹽流動相可以配置后放入冰箱冷藏，臨時用放置至室溫。

對于有機相溶液，可以不用擔心細菌繁殖的問題。但是有機相容易發生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發生聚合，瓶子里就會出現一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過程的發生，裝乙腈時要用棕色的溶劑瓶，避免陽光直射，更換乙腈時應當棄去瓶底剩余的溶液。

溶劑瓶里的過濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質進入到儀器的流路系統中，它的材質通常分為玻璃燒結石英或不銹鋼，如果不慎堵塞會造成流動相吸液不暢，在管路中造成氣泡，需進行清洗，玻璃材質的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質的可以直接進行超聲清洗。