【干貨分享】色譜定量方法介紹

色譜分析的重要作用之一是對樣品進行定量，色譜定量的依據是：組分的重量或濃度與檢測器的響應信號成正比。選擇合適的定量方法時，除需要考慮相對定量還是絕對定量外，同時也需要考察化合物的線性響應范圍、是否有合適內標、是否有標準品等。常見的定量方法有內標法、外標法、面積歸一法、加校正因子的主成分自身對照法與不加校正因子的主成分自身對照法等。本文將對zui常用的內標法、外標法、面積歸一法三種方法進行介紹。

內標法是將一定重量的純物質作為內標物加到一定量的被分析樣品混合物中，根據測試樣和內標物的質量比及其相應的色譜峰面積之比及相對校正因子，來計算被測組分的含量。

精密稱（量）取對照品和內標物質，分別配成溶液，各精密量取適量，混合配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量進樣，測量對照品和內標物質的峰面積，計算校正因子。

再取按標準制備中含內標物質的供試品溶液，進樣，測量供試品中待測成分和內標物質的峰面積，再計算含量（其中Ax：供試品圖中待測成份峰面積；A`S: 供試品圖中內標物峰面積；C`S：供試品圖中內標物濃度）。

外標法是用待測組分的純品作對照物質，以對照物質和樣品中待測組分的響應信號相比較進行定量的方法。它不是把標準物質加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定，把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進行比較求得被測組分的含量。此法可分為外標一點法與標準曲線法。

如標準中有系統適用性要求，首先需確認系統溶液能滿足條件，否則檢測無效。一般要求對照品配制兩份，一份連續進5針以計算RSD，如無特殊要求，RSD不超過2%。符合了，說明系統沒問題，再進行后面的實驗。樣品也同樣需要配制兩份，兩份樣品最終結果的RSD同樣不能超過2.0%。

由于組分的量與其峰面積成正比，按各品種項下的規定，配制供試品溶液，取一定量進樣并記錄色譜圖，測得各峰的峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算各峰面積占總峰面積的百分比。

計算公式：

總雜（%）=1-主成分峰面積百分比

單雜峰直接從積分結果表中讀取即可

此法結果很不準確，一般在工藝研究、原料合成過程中的中間體等中用來檢測大致數據做參考用。