凝膠過濾層析中的重要參數

凝膠過濾層析是利用具有多孔網狀結構的凝膠顆粒的分子篩作用，根據被分離樣品中各組分分子量大小的差異進行洗脫分離的一項技術。今天主要為大家介紹一下凝膠過濾層析中的一些重要參數。

#1 凝膠顆粒大小

指不能進入凝膠顆粒內部孔隙的最小分子的分子量。排阻極限反應某種凝膠能有效分離的最大分子量，所有大于排阻極限的分子均被*排阻，不能分離。如Tandex G25的排阻極限為5000Da，它表明分子量大于5000Da的分子為全排阻。

所能進入凝膠內部孔隙的最大分子和最小分子的分子量范圍。它表示一種凝膠適用的分離范圍，如Tandex G25對球形蛋白的分級分離范圍為1000-5000Da，它表示通過Tandex G25可有效分離分子量在這個范圍內的球形蛋白。

柱內凝膠顆粒之間的空隙體積的總和，用V_o表示。

干膠溶脹后顆粒本身所固有的體積，用V_g表示。

凝膠顆粒內部孔隙體積的總和，或者為小分子溶質可滲透進入凝膠內部體積的總和，又稱固定相體積，用V_i表示。

凝膠柱裝成后從柱底板到凝膠沉積層表面的總體積，又稱床體積，用V_t表示。

式中，K_d是分配系數；V_e一般介于V_o和V_o+V_i之間。對于*排阻的大分子，由于其不進入凝膠內部，只能在顆粒間隙中流動，故其洗脫體積V_e=V_o；而對于*滲透的小分子，由于它可在整個凝膠柱內流動（忽略V_g），故其洗脫體積V_e=V_o+V_i；分子量介于兩者之間的分子，它們的洗脫體積也介于兩者之間；一些吸附蛋白在最后洗出。