藥品中基因毒性雜質(zhì)的痕量分析，非得用MS嗎？

目前對于藥品中含有的極少量物質(zhì)（如基因毒性雜質(zhì)等），在對其進行痕量分析時，通常采用的檢測手段是：利用先進的液質(zhì)聯(lián)用（如LC-MS或LC-MS/MS等）、氣質(zhì)聯(lián)用（如GC-MS或GC-MS/MS等）設(shè)備，對其微量物質(zhì)進行檢測時所需液相色譜系統(tǒng)可能為更高級的超高效液相色譜儀。

如檢測藥物中含有亞硝胺類基因毒性雜質(zhì)NDMA，根據(jù)不同原料藥的性質(zhì)不同，目前國際上公布的方法主要有：GC-MS法、GC-MS/MS法、UPLC-APCI-MS/MS法，HPLC-UV法（EDQM公布）。國內(nèi)官fang公布的方法主要有GC-MS法、GC-MS/MS法、UPLC-APCI-MS/MS法，如中國藥典2015年版二部推薦使用GC-MS法（詳見《纈沙坦》原料中N-ya硝基二甲胺的含量測定方法），不推薦使用HPLC-UV法，因為HPLC-UV法靈敏度比質(zhì)譜儀的靈敏度差很多，而且專屬性差些，容易受到檢測干擾，故HPLC-UV法具有很大的局限性，只能準確測定那些含量相對較高的物質(zhì)。

然而現(xiàn)有檢測技術(shù)中：

● 質(zhì)譜儀價格昂貴，運行成本高，所需的試劑要求高，抗干擾能力差，維護保養(yǎng)費用很高，同時對質(zhì)譜儀操作人員的水平要求非常高，需要高層次的人才方能準確操控。故質(zhì)譜儀普及率非常低，一般企業(yè)較少購置，對于需要使用質(zhì)譜儀進行痕量分析時只能委托特定的機構(gòu)使用質(zhì)譜儀進行檢測。

● 氣相色譜/質(zhì)譜法操作過程繁瑣，經(jīng)過前處理后樣品損失嚴重。

● 高效液相色譜儀價格便宜，操作容易，覆蓋面廣，一般企業(yè)均很常見。但是單純使用HPLC-UV法進行檢測含量極少的物質(zhì)時，其靈敏度差，不能準確定量檢測出復(fù)雜原料藥中含量極低的物質(zhì)，且檢測過程中目標化合物所受干擾亦較大，目標化合物與其它雜峰之間的分離難度較大。

基于以上痕量檢測的難點，沒有質(zhì)譜儀的幫助，實驗人員是否可以通過長期大量的研究，不斷嘗試各項色譜條件的調(diào)試，諸如：流動相試劑的組成、梯度程序設(shè)置、柱溫、流速的改變等。

特別是色譜柱的篩選，如雖然同樣都是十八烷基硅烷鍵合色譜柱，可以嘗試不同品牌、不同系列的C18柱，色譜柱間填料的差異會呈現(xiàn)出對樣品的不同選擇性。另外，色譜柱規(guī)格的差異也會帶來不同的檢測效果，如色譜柱的內(nèi)徑越細靈敏度越高、色譜柱越長柱效越高、填料的粒徑越小分離效率越高……光是色譜柱就有多達7項以上的可調(diào)節(jié)參數(shù)。

最近就有一家藥企嘗試走了這樣一條路，對尼扎替丁中所含痕量雜質(zhì)N-ya硝基二甲胺（NDMA）檢測方法進行了長期研究，最終探索出一種采用HPLC法測定樣品中NDMA的方法，該方法簡便快速，且測定結(jié)果準確。

這就是湖南威特制藥股份有限公司。在他們的開發(fā)報告中記錄到：

“我們首先嘗試解決了色譜分離的問題，因供試品溶液濃度很大，其他峰對目標物質(zhì)NDMA的干擾較多，在摸索優(yōu)化檢測方法的過程中，對色譜柱的選擇做了大量的工作，既要不被干擾，又要保證峰形正常，且需能夠增加該峰的檢出能力，最后選擇了特定的月旭Ultimate^® ODS-3  4.0×250mm，3μm色譜柱，且此型號的色譜柱批間差異較小。保證了該方法成功通過了方法學驗證，并最終獲得了發(fā)明專li授權(quán)。”

湖南威特測試了來自至少4個色譜柱廠家的十幾種C18柱，最終月旭Ultimate^® ODS-3 4.0×250mm，3μm這款柱子展現(xiàn)了其du特的分離和檢測特性，4.0mm內(nèi)徑具有更高的靈敏度，3μm粒徑也提供了更高的柱效。在這款色譜柱的基礎(chǔ)上，客戶繼續(xù)配合優(yōu)化其他的色譜條件，最終確定了這個簡便快捷，且測定結(jié)果準確的HPLC方法。

艱辛的付出，終于獲得了回報。感謝湖南威特為我們示范了超高的液相方法開發(fā)水平，展示了不同色譜條件配合玩轉(zhuǎn)色譜柱，為方法開發(fā)帶來的無限可能！

參考文獻：

一種HPLC法檢測尼扎替丁中N-ya硝基二甲胺的方法

（專li號：ZL202110045224.4；授權(quán)公告日：2023.07.28）