利巴韋林化學名稱為：1-b-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺。又稱三氮唑核苷或病毒唑，是一種能抑制核酸合成的廣譜抗病毒yao。
傳統的HPLC法均采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱檢測利巴韋林，但是該柱填料存在一些缺點。一方面硅膠填料鍵合的C18鏈會脫落，在較高的pH條件下，硅膠基質易降解；另一方面，由于利巴韋林分子結構上含有機氮基團，在硅膠基材的色譜柱中，會因色譜柱填料中殘存的硅羥基與有機氮結構產生氫鍵吸附，導致樣品部分地粘附在色譜柱的填料上，從而造成峰形拖尾和柱壓升高。
月旭材料科技（上海）有限公司推出的專用于利巴韋林分析的色譜柱，系采用高品質離子排阻色譜填料——磺化聚苯乙烯/二乙烯基苯填料填裝制成的氫型強陽離子交換色譜柱，符合美國25版藥典收載的利巴韋林含量測定HPLC測定法，以及中國2005版和2010版藥典中對色譜柱的要求。具有耐酸、耐高溫的特點，并可通過提高柱溫提高分析效率。
使用步驟：
1．用兩通取代色譜柱將儀器連接，用過濾好的超純水沖洗儀器50ml；
2．再用分析流動相沖洗儀器50ml，將流速降到0ml/min；
3．將Xtimate® Sugar-H色譜柱連接在 HPLC系統上；
4．設置流速在 0.2-0.3ml/min直到柱溫達到設定值；
5．在柱溫達到設定值時，流速增至分析流速，流速變化以0.1ml/min為增量,待反壓穩定后再繼續增加流速。zui大流速不應使壓力超過1500psi。
流動相要求：
常用5~10 (mmol/l)的硫酸作為流動相。推薦的流動相用去離子的無菌水配制，水應去離子化 ,大于2兆歐的電阻率 ,水中應不含多價離子 ,尤其是過渡金屬元素和重金屬離子。使用前需用真空泵通過0.45um或更小孔徑的濾膜除去細菌和其它顆粒，溶劑過濾推薦使用溶劑過濾器。
雖然流動相已經在真空過濾時脫氣,但還是應該通過以下程序來*脫氣. 如果系統連續使用不止一天 ,請將流動相置于錐形瓶中 ,放在攪拌器 /電爐上 ,用鋁箔封上瓶口以減小蒸發,用前將流動相燒至沸點幾分鐘,使用時保持溫度 70‐90℃.這個操作能夠保證氣體 (尤其是CO2)不再重新溶解在流動相中,同時也會防止微生物的滋生。
要保持裝流動相的容器干凈,有蓋,且新鮮 ,流動相需每 24小時重新配制。
注意事項:
通常推薦壓力不超過 1500psi；
zui大流速推薦不超過 0.6ml/min(70℃) ；
流動相中有機相的zui大含量為5%(V/V),樣品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和異丙醇不會影響柱子的性能；
柱子的溫度不要超過 95℃.通常高溫會帶來高的分辨率,但在 90‐95℃之間幾乎沒有變化，70℃以下對于許多糖,就異構體的分離來說不能提供足夠的分辨率,對于乙醇的定量,柱溫應在75℃；
柱溫的快速變化不會對柱子帶來什么反作用,如果柱子在 60℃以下,那么zui高的流速為0.2ml/min,由于水在低溫時的高的粘度因此高的流速會帶來很高的反壓；
定期反向沖洗色譜柱(在每 5L流動相之后),這將會有效地延長色譜柱的壽命；
流速的變化不能超過0.5ml/min,流速變化應該緩慢進行,建議改變流速時以0.1ml/min為增量,直到反壓穩定后再繼續增加流速.任何的流速變化均要在不超過 0.5ml/min下進行；在溶劑輸出系統中壓力限制的設定應比普通的工作壓力高出幾百psi,從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高。
保存條件:(72小時以上不用)
關掉柱溫箱,待柱子冷卻至室溫，停泵。
當柱子冷卻后,從系統中移出,換上塑料堵頭,防止保存溶劑揮干,通常的流動相都可作為保存柱子的適宜溶劑.在冰箱中5℃保存(不要冷凍),以防止微生物的滋生；
柱子拆掉后要用兩通連接在系統上, 先用水沖洗整個液相色譜系統,然后用甲醇,zui后儀器系統保存在甲醇中。
在關機后的重新啟動
當開啟帶有一個柱溫很低的柱子的系統時,打開柱溫箱,流速開始不要超過 0.2ml/min.待系統在此條件下穩定至少二十分鐘達到工作溫度后再按通常的工作條件操作。
整夜的停機(放置少于 72小時)
柱子留在系統中流速降到 0.2ml/min.循環溶劑,將流出的管路插入流動相瓶中,如果不想開著柱溫箱,那就關掉柱溫箱讓其冷卻。
在整夜停機后的開啟
打開柱溫箱,流動相的流速不要超過 0.1‐0.2ml/min,保持此流速至少二十分鐘直到達到柱子工作所需溫度,然后再按照通常分析條件來設置。
故障檢查
Sugar‐H是以樹脂的膨脹形態緊密裝填的,如果樣品進行了很好的前處理,那么大部分產生的問題都和樹脂填料有關,由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加, 脆弱的樹脂填料可能被泵的波動沖到柱子的后篩板處.反壓的增加是否會發生,要經常檢查在線過濾器以及保護柱中是否截留了微粒.如果不是此問題,那么很可能是樹脂部分地堵在了出口端的篩板處,檢查這種情況是否發生需要關掉泵,將柱子的流路方向反過來,然后泵流速開到 0.1ml/min,20分鐘達到工作溫度后再設至工作時的流速。
柱子的再生步驟:
Sugar‐H柱子的再生方法根據相關的樣品純度有不同的變化,越是天然物,(尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機酸的樣品)越需要經常地對柱子進行再生,因為它們會與柱子發生置換。
如果利巴韋林的峰有拖尾,那么柱子需要做以下處理:
配制 500ml的再生溶液(pH2.5的稀硫酸), 把柱子流路方向反過來,在 90℃下以0.5ml/min的流速沖洗一整夜.再生之后回到正常方向使用。當柱子反沖時很重要的一點是需要保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗,用冷的溶劑將會延緩沖洗的過程。
